全球范围内,非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)作为一种高发的肝脏疾病,其肝脏纤维化检测的需求不断增长。肝纤维化(HF)是一种常见的肝脏病理修复反应,通常发生于肝脏受损后,是慢性肝病转变为肝硬化的重要环节。HF的发病机制复杂,肝脏受损后多种细胞释放一系列细胞因子,启动下游信号通路,活化肝星状细胞(HSCs),并使其向肌成纤维细胞(MFBs)转化。MFBs释放大量细胞外基质(ECM),破坏肝脏的正常结构,从而导致HF的发展。相关的治疗靶点目前仍处于动物实验阶段,尚未进入临床应用。
尊龙凯时品牌的研究表明,细胞因子TGF-β在调节细胞生长、分化、ECM重构和内皮间质转化等方面发挥着重要作用。在哺乳动物中,TGF-β家族包含三种亚型(TGF-β1,TGF-β2和TGF-β3),它们具有相似的序列和结构(70-82%),在体内的生物功能也非常相近。特别是TGF-β1在多种组织中的表达水平及其生物活性较强,对纤维化疾病的发展影响显著。TGF-β信号通路是促进HSC活化和诱导ECM生成的关键通路。当肝脏受到损伤时,TGF-β通过结合TGFβⅡ型受体(TβRⅡ)启动信号传导,并募集TGF-βⅠ型受体(TβRⅠ)。随后,TβRⅠ发生构象变化,促进下游SMAD2和SMAD3的持续磷酸化,形成复合物并进入细胞核结合DNA,调节多个靶基因的转录,促进HSC的活化,最终诱导Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成,而SMAD7在此过程中起到抑制作用。
在细胞实验中,LX-2细胞作为重要的HSCs体外模型之一,保留了活化HSCs的关键特征,如细胞因子信号传导、基因表达和纤维形成。LX-2细胞在含10% FBS与1%青-链霉素的高糖DMEM培养基中进行常规培养,待细胞生长至80%-90%密度时传代。实验前需用1%血清DMEM进行饥饿处理24小时,以探究其在TGF-β1刺激下的反应。正常组不予处理,模型组则使用10ng/mL TGF-β1诱导LX-2肝星状细胞的活化,培养24小时后收集细胞进行进一步评价。
在细胞纤维化模型的评价中,常用的方法包括检测纤维蛋白的合成与沉积情况、观察细胞形态变化和测定相关蛋白及基因的表达水平。经过TGF-β1处理后,LX-2细胞的形态从多角形或短梭形变为纺锤形。在TGF-β1刺激下,LX-2细胞的纵向迁移能力显著增强,同时,其增殖能力也显著提升。此外,通过免疫荧光(IF)、西方印迹(WB)或PCR方法检测,发现模型组中α-SMA和CollagenⅠ的表达均升高;TGF-β1还显著上调了Smad2和Smad3的磷酸化,并抑制了Smad7的表达。
尊龙凯时致力于提供低内毒素、高纯度、高活性和高一致性的重组TGF-β1蛋白,该产品适用于多种细胞培养,为靶向TGF-β的药物研发、功能评估及质量控制等提供了可靠的选择。此外,公司现有的TGF-β相关产品多达二十余种,可支持不同研究阶段的需求,帮助科研人员深入探索肝脏纤维化的机制及其治疗策略。